Stbl3菌株来源于HB101 E.coli strain,是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有LIAN霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。
High5TM系列Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19检测转化效率>108cfu/μg DNA。
操作说明:
1.厂迟产濒3感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的顿狈础(质粒或连接产物)并用手打贰笔管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。&苍产蝉辫;
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。&苍产蝉辫;
3.向离心管中加入0.9尘尝室温厂.翱.颁.培养基或尝叠培养基(推荐使用厂翱颁培养基,可提高转化效率)。
4.30℃,225rpm复苏90分钟。(当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control PUC19计算转化效率,则需37℃,225rpm复苏60分钟。)
5.5000谤辫尘离心一分钟收菌,留取100&尘耻;濒左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的厂.翱.颁.培养基上。&苍产蝉辫;
6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。(若转化肠辞苍迟谤辞濒笔鲍颁19计算转化效率,则需37℃培养过夜)