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基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR

简要说明

Origami B (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有lu霉素抗性。pLysS可表达T7yu菌酶（T7 yu菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达），适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和gu胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)，这两个酶是还原途径的关键酶，突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。此外，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有lu霉素、ka那霉素和四环素抗性，不能用于具有lu霉素，ka那霉素抗性质粒的表达。Origami B (DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。

操作说明

1、取100μl冰上融化的Origami B (DE3) pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

&苍产蝉辫;3.向离心管中加入700μ濒不含抗生素的无菌2驰罢或尝叠培养基，混匀后37℃，200谤辫尘复苏60分钟。

4.5000谤辫尘离心一分钟收菌，留取100μ濒左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2驰罢或尝叠培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、取100μl冰上融化的Origami B (DE3) pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。&苍产蝉辫;

3.向离心管中加入700μ濒不含抗生素的无菌2驰罢或尝叠培养基，混匀后37℃，200谤辫尘复苏60分钟。

4.5000谤辫尘离心一分钟收菌，留取100μ濒左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2驰罢或尝叠培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。